I.N.C.D.M.I CANTACUZINO

Spl.Independentei 103

C.P. 1- 525

Bucuresti – România

SER MONOSPECIFIC ANTI PROTEINĂ “C” REACTIVĂ, LIOFILIZAT

REACTIV BIOLOGIC PENTRU DIAGNOSTIC “IN VITRO”

Scopul utilizarii:

Serul monospecific anti proteina “C” reactiva se utilizeaza în analiza imunochimica pentru evidentierea proteinei “C” reactive (CRP) umane, proteina patologica, din serul pacientilor, prin tehnicile de precipitare în gel:

1. dubla difuzie Ouchterlony (DD) pentr 343f517d u determinarea calitativa a CRP;

2. imunodifuzie radiala simpla Mancini (IDRS) pentru determinarea cantitativa a CRP.

Se recomanda utilizarea sa la evidentierea CRP, “proteina de faza acuta”, sintetizata de ficat, ce reprezinta un marker important pentru existenta evenimentelor inflamator – distructive, infectioase sau neinfectioase.

Valori crescute ale CRP se pot întâlni în infectii bacteriene acute sau cronice, generalizate sau localizate, afectiuni reumatismale, boli inflamatorii asociate cu procese necrozante (infarct miocardic, unele neoplazii), traumatisme extinse, boli neurologice, etc. Valorile CRP pot constitui un indicator pentru diagnosticul diferential între infectiile bacteriene (valori mult crescute) si cele virale (valori normale sau usor crescute) si pot servi la monitorizarea unor tratamente cu antibiotice, antiinflamatoare sau citostatice.

Principiul:

DD: difuzia antigenului (CRP din probele de analizat) si a anticorpilor monospecifici anti-CRP, aflati în godeuri diferite, unii spre ceilalti, într-un gel de agar, determina formarea unei linii de precipitare la zona de echivalenta.

IDRS: difuzia radiala a antigenului (CRP din proba de analizat) dintr-un godeu într-un gel ce contine o cantitate constanta de anticorpi monospecifici anti-CRP, determina formarea unui inel de precipitare, al carui diametru la patrat este direct proportional cu concentratia antigenului.

Compozitia

Ser ce contine anticorpi monospecifici fata de proteina “C” reactiva.

Se prezinta sub forma de pastila liofilizata, de culoare alb-galbuie (1 ml de ser anti-CRP pe fiola), care se reia în 1 ml apa distilata. Produsul contine azida de sodiu 1‰, mertiolat de sodiu 1‰₀ si protector pentru liofilizare, glicocol 2,5%.

Produsul este ambalat într-o cutie de carton (5 fiole/cutie) împreuna cu prospectul.

Pastrare: la +2⁰C…+8⁰C.

Stabilitate:

Produsul va fi utilizat pâna la data expirarii, care este indicata pe cutie.

Dupa reluare, se mai poate utiliza prin pastrare la +2⁰C…+8⁰C, într-un flacon de sticla închis etans, timp de 30 de zile.

Colectarea si prepararea probelor:

Nu se impun conditii speciale de pregatire a pacientului pentru prelevarea probelor de sânge si nici pentru colectarea acestora. Se lucreaza pe probe de ser, care se separa de cheag prin centrifugare, în cel mult 4 ore de la colectare, dupa procedura standard. Nu se vor utiliza probe de plasma.

Conditii de pastrare a probelor:

- tuburi închise etans, pentru evitarea contaminarii si evaporarii;

- +2⁰C…+8⁰C timp de 3 zile;

- congelate timp de 6 saptamâni.

Procedura de lucru:

Materiale necesare nefurnizate:

- Gel de agar 1% în tampon veronal pH=8,6, forta ionica 0,05;

- Tampon veronal pH=8,6, forta ionica 0,1;

- Lame de sticla pentru microscop;

- stanta pentru decupat godeuri;

- Micropipeta automata fixa (5l) si/sau cu volum variabil

(5-50 l);

- Conuri de prelevare corespunzatoare;

- Ser de referinta pentru proteina “C” reactiva, liofilizat (cod catalog 446);

- Pipeta de 1 ml;

- Apa distilata pentru reluarea Serului monospecific anti-CRP, liofilizat si a Serului de referinta pentru CRP, liofilizat;

- Solutie fiziologica salina pentru diluarea Serului de referinta pentru CRP, utilizat la trasarea curbei de etalonare.

DD: reactia se executa pe lame de microscop acoperite uniform cu 3,5 ml gel de agar 1% în tampon veronal pH=8,6, forta ionica 0,05, în care se perforeaza 2-3 rozete a 4-6 godeuri periferice la o distanta egala de 0,3 cm de godeul central.

Toate godeurile au diametrul de 0,3 cm. În godeul central se introduce Serul monospecific anti CRP, în doua godeuri periferice opuse se introduce Serul de referinta pentru CRP, iar în celelalte godeuri periferice serurile umane de analizat. În acest fel, fiecare ser studiat se învecineaza cu Serul de referinta. Lamele se pun în camera umeda (cutie Petri) la 37⁰C timp de 24 ore, pentru migrare.

IDRS: se utilizeaza gel de agar 2% în tampon veronal pH=8,6, forta ionica 0,05, care se amesteca la 56⁰C cu antiserul monospecific anti-CRP, în proportie de 2:1, titrul antiserului fiind stabilit prin tatonari anterioare, astfel încât sa se obtina inele de precipitare cu contur net si de marimi convenabile. Dupa solidificare, în gelul de agar se practica godeuri cu diametrul de 0,3 cm în care se introduc câte 5l din probele de analizat, precum si aceeasi cantitate din Serul de referinta pentru CRP, în 3 concentratii diferite, obtinute prin diluarea acestuia în solutie fiziologica salina, pentru trasarea curbei de etalonare.

Rezultate si criterii de interpretare:

DD: dupa un timp de incubare de 24 ore la 37⁰C, se citesc rezultatele în fata unei surse de lumina (eventual cu o lupa). Aparitia unor linii de precipitare între godeul central al rozetei si godeurile periferice indica rezultat pozitiv, iar lipsa acestora, rezultat negativ. Între godeul central al rozetei si godeurile utilizate pentru Serul de referinta pentru CRP trebuie sa se formeze linii de precipitare.

IDRS: dupa un timp de difuzie de 24 de ore la 37⁰C, se masoara diametrele inelelor de precipitare (mm) pentru cele 3 concentratii diferite ale Serului de referinta pentru CRP si se traseaza curba de etalonare (pe ordonata se înscriu diametrele la patrat în mm patrati ale inelelor de precipitare, iar pe abscisa concentratiile de CRP în mg/dl).   

Concentratia CRP din probe se stabileste prin integrarea pe curba de etalonare a diametrelor la patrat ale inelelor de precipitare obtinute pentru acestea, iar de pe abscisa se citeste continutul în mg/dl CRP corespunzator fiecarei probe.

Precautii:

Nu se vor utiliza fiolele fisurate sau neetichetate.

ATENŢIE!

Atât probele de ser, cât si reactivii vor fi manipulati cu precautie, fiind materiale potential infectioase.

Performante analitice:

Specificitate: monospecific anti proteina “C” reactiva

Titru Becker: 0,1 mg/ml anticorpi anti CRP  30%

Valorea normala în ser: sub 1 mg/dl CRP

În caz de reclamatii, se va anunta producatorul, mentionându-se numarul seriei, numarul de control si data expirarii, indicate pe cutie.

Data ultimei revizuiri a prospectului: 09