4. ACURATETEA METODEI

Folosirea standardelor de referinta pentru stabilirea acuratetei metodei este inutilizabila in cele mai multe cazuri pentru ca acestea sunt foarte scumpe si livrate in cantitati foarte mici.

In concordanta cu recomandarile ICH. studiul acuratetei unei metode analitice se va efectua prin metoda adausurilor si va fi descrisa in exenso mai jos.

Pentru aceasta sunt necesare urmatoarele:

a.      o proba din produsul analizat ( codificata Tx)

b.     un standard de lucru ( codificat Sx)

In metoda de analiza a componentului X se va lucra cu concentratia de lucuru stabilita anterior ( absorbtie cuprinsa intre 0.4- 0.6)

Concentratiile finale ale solutiilor vor fi preparate intr-o arie de concentratii intre 70% si 130% din concentratia teoretic si vor trebui sa fie lineare in acest interval.

Pentru calcularea rezultatelor se va realiza o curba de calibrare astfel:.

Solutia stok: A ppm 100 ml

A ppm x 3 /50 = 70 ppm

4/ 50 = 100. ppm

5/50 = 130 ppm

Ecuatia curbei:

A=

B=

R=

Conditii de admisibilitate:

pentru ppm

a.     solutia start: componentul X este preparat la o concentratie de 700 ppm (coded as A 16216k1014q x);

b.     solutia sotk: standardul de lucru este preparat la o concentratie de500 ppm ( coded as Sx);

c.     solutia masurata : ( dilutii cu solventul recomandat)

Solutiile preparate sunt masurate si concentraiile componutului X sunt determinate din curba de calibrare realizata.

Cantitatea de Sx adaugata este considerate a fi cunoscuta fiind preparata din standard, in timp ce concentratia lui Tx ete necunocuta.

Pentru rezultatele obtinute recuperarea lui Sx este calculata si comparata cu una teoretica (100

Conditii de admisibilitate

Media recuperarii

Interval: 99.0 to 101.0 %

Pentru 130 ppm

d.     solutia start: componentul X este preparat la o concentratie de 1300ppm (coded as Bx);

e.     solutia sotk: standardul de lucru este preparat la o concentratie de500 ppm ( coded as Sx);

solutia masurata : ( dilutii cu solventul recomandat)

Solutiile preparate sunt masurate si concentraiile componutului X sunt determinate din curba de calibrare realizata.

Cantitatea de Sx adaugata este considerata a fi cunoscuta, fiind preparata din standard, in timp ce concentratia lui Tx este necunocuta.

Pentru rezultatele obtinute recuperarea lui Sx este calculata si comparata cu cea teoretica (100)

Conditii de admisibilitate:

Media recuperarii

Interval : 99.10 to 100.97%

5. LIMITA DE DETECTIE (LOD)

LIMITA CANTITATII MASURABILE (LOQ

Pentru meodele intrumentale calea de determinare a LOD si LOQ este din linearitatea curbei de calibrare.

Dupa elaborarea rezultatelor matematice una din valorile obtinute este si parametrul 's' care este deviatia standard al slopului curbei de calibrare

LOD and LOQ sunt calculate dupa formulele:

LOD = 3 s + A

LOQ = 10 s + A

LOD este in general deteminat prin metode neistrumentale prin analize de probe de concentratii cunoscute ale analitului stabilind nivelul minim la care acesta este inca detectat.

LOQ este in general deteminat prin metode instrumentale prin analize de probe de concentratii cunoscute ale analitului stabilind nivelul minim la care acesta este inca detectat cu o precizie si acuratete acceptabila ( ex. R.> 0.9).

EXEMPLU

4. ACURATETEA METODEI

4.1 analiza albendazolului

pentru a examina acuratetea metodei s-a folosit metoda aditiei

Procedura:

Solutia start A o solutie de albendazol la o concentratie de aproximativ 200 mg /ml a fost preparata

(20.4mg / 100 ml = 204 ppm).

Solutia start B o solutie de albendazol la o concentratie de aproximativ 300 mg /ml a fost preparata

(30.0mg / 100 ml = 300 ppm).

Solutia stoc : solutia de lucru de albendazol a fost la o concentratie de 100 ppm.

(10mg/ 100 = 100 ppm).

Solutiile de masurat (dilutii cu solvent)

A0: 2.0 ml din solutia de start / 100.0 ml

A1: 2.0 ml din solutia de start + 1.0 ml din solutia stock.

A2: 2.0 ml din solutia de start + 2.0 ml din solutia stock

A3: 2.0 ml din solutia de start + 3.0 ml din solutia stock

A4: 2.0 ml din solutia de start + 4.0 ml din solutia stock

Pentru calculul rezultatelor s-a realizat o cuba de calibrare astfel

Stock solution: 200 ppm /100 ml

200 ppm x 2.0/100 = 4 ppm

2.5/100 = 5 ppm

3.0/100 = 6 ppm

3.5/100 = 7 ppm

4.0/100 = 8 ppm

4.5/100 = 9 ppm

5.0/100 = 10 ppm

R = 0.999856

ECUATIA Y = 0.0728 X + 0.0143

media recuperarii: 100.057%

interval : 99.45% to 100.89 %

5. LIMITA DE DETECTIE (LOD)

LIMITA CANTITATII MASURABILE (LOQ

Pentru meodele intrumentale calea de determinare a LOD si LOQ este din linearitatea curbei de calibrare.

Dupa elaborarea rezultatelor matematice una din valorile obtinute este si parametrul 's' care este deviatia standard al slopului curbei de calibrare

LOD and LOQ sunt calculate dupa formulele:

LOD = 3 s + A

LOQ = 10 s + A

LOD este in general deteminat prin metode neistrumentale prin analize de pobe de concentratii cunoscute ale analitului stabilind nivelul minim la care acesta este inca detectat.

LOQ este in general deteminat prin metode istrumentale prin analize de pobe de concentratii cunoscute ale analitului stabilind nivelul minim la care acesta este inca detectat cu o precizie si acuratete acceptabila ( ex. R.> 0.9).

D. a.LIMITA DE DETECTIE

ECUATIILE OBTINUTE IN VALIDARE;

1.LINEARITATE:

ECUATIA = Y = -0.0047 + 0.0772X

R =

2.PRECIZIE

I-a zi:

ECUATIA = Y = 0.0068 + 0.0757 X

R = 0.999982

3.PRECIZIE

II-a zi:

ECUATIA: = Y = 0.0157 + 0.0738 X

R = 0.999976

4.ACURATETE;

ECUATIA = Y = 0.0143 + 0.0728 X

R = 0.999856

TABELUL VALORILOR

SE OBTIN URMATOARELE VALORI:

CALCULELE REALIZATE CU ANOVA

CALCULE REALIZATE CU ORIGINE

Deviatia standard a slopului : 0.0010885

Limita de detectie bazata pe deviatia standard a slopului curbei de calibrare

DL = 3.3 s / s = 3.3 x 0.0010885/ 0.073539 = 0.0488 mg/ml

Unde : s = deviatia tandad a slopului

s = slopul curbei de calibrare

Determinarea limitei de detectie prin metode instrumentale:

S-a utilizat o solutie de albendazol in NaOH 0.1 N

The concentration was :

solutia A = 0.6 mg /100 ml = 6 mg/ ml

solutia B = 10 ml din A /100 ml = 0.6 mg/ ml

solutia C = 5 ml din A / 100 ml = 0.3 mg/ ml

Solutia D = 2.5 ml din A /100 ml = 0.15 mg/ ml

Solutia E = 1.0- ml din A /100 ml = 0.06 mg/ ml

Peak-ul albendazolului poate fi observat.

Urmatoarea dilutie : 2.5 ml din sol B / 100 ml = 0.015 mg/ ml

peak-ul nu poate fi diferentiat

CONCLUZII:

Limita de detectie obtinuta prin deviatia standard a slopului, si prin metoda instrumentala se afla intr-un raport de 3:1

In aceste conditii media determinarilor indica:

o valoare la = 0.030 mg/ml considerata in metoda, cea mai mica cantitate decelabila.

D.b. DETERMINAREA CANTITATII LIMITA MASURABILA

Deviatia standard a slopului =0.0010885

Cantitatea cea mai mica masurabila bazata pe metoda instrumentala:

Concentratiile au fost

mg/ml .......0.0151

mg/ml....... 0.0266

mg/ml........ 0.0518

R= 0.99985

Valoarea de 0.15 , mg/ml este cea mai mica cantitate masurabila

Daca luam in considerare valoarea cea mai mica detectabila si o introducem in ecuatia obtinuta , avem pentru extinctie o valoare de

= 0.004957 care se situeaza sub valoarea extinctiei de 0.06.

Valoarea cantitatii celei mai mici masurabile determinare din calcule

DL = 10 s / s = 10 x 0.0010885 / 0.073553 = 0.147988mg/ml

Unde s = standard deviation of the slope

s = the slope of the calibration curve

CONCLUZII:

Exista o corelatie excelenta intre valorile obtinute prin calcule si ceele obtinute prin metodea insterumentala ; in ceste conditii cantitatea cea mai mica masurabila este = 0.15 mg/ml

5. ROBUSTETEA METODEI

Pentru demonstrarea robustetii s-a utilizat metoda compararii rezultatelor realizate pe doua instrumente diferite CINTRA 5 si PERKIN ElMER - calibrat cu etalon de holmiu.

S-au executata 3 citiri consecutive pe ambele aparate, respective, comparandu-se RSD%- urile .

CINTRA 5   PERKIN ELMER

MEDIE: 0.5332   MEDIE: 0.5304

SD= 0.00105   SD= 0.001268

RSD% = 0.1976%   RSD% = 0.239%

Valorile unite ale citirilor:

MEDIE: 0.18

SD= 0.001829

RSD% = 0.3439

CONCLUZII:

Robustetea metodei este demonstrata avand in vedere ca citirile insumate pe cele doua aparate prezinta un RSD% < 1.